磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒

产品货号：

YTB4641

中文名称：

磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒

英文名称：

BalbMag Blood Genomic DNA Isolation Kit with Magnetic Beads

产品规格：

50T|200T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本制品是一种基于新型的硅羟基包被的磁珠作为固相介质，用于安全、便捷、稳定、高效、高质量地分离纯化动物血液基因组DNA的试剂盒。

产品应用

本试剂盒抽提后获得的基因组DNA可以用于基因组DNA的PCR扩增、酶切、基因分型、Southern杂交、高通量测序(HTS)、基因组DNA文库的构建等各种常规的基因组DNA分析和实验检测。

工作原理

本试剂盒的原理和主要操作流程如图1所示。血液样品在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解，释放出来的基因组DNA在特定条件下与硅羟基包被的磁珠特异性结合[1]，然后在外界磁场(如磁分离架)的作用下，磁珠与溶液可以快速而高效地分离，再经两次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将基因组DNA从磁珠上洗脱下来，即可获得高质量的基因组DNA。

图1．BalbMag磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒(货号：YTB4641)的基因组DNA抽提原理图。

产品特点

本试剂盒抽提效果稳定、得率高、纯度好。本试剂盒的基因组DNA抽提体系经过反复优化，稳定性强，得率高，纯度好。100μL人全血中抽提得到约4.5μg基因组DNA，100μL兔全血中抽提得到约5.6μg基因组DNA，且纯度好，A260/A280通常为1.7-1.9。本试剂盒能从低至25μL的哺乳动物全血样品、5μL的有核红细胞抗凝血样品中抽提得到高质量的基因组DNA。本试剂盒与T公司同类产品的抽提效果对比参见图2。

图2．BalbMag磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒(货号：YTB4641)与T公司同类产品的基因组DNA抽提效果对比图。样品为新鲜100μL兔全血，洗脱液用量为50μL。均取8μL洗脱的样品经混合2μL DNA上样缓冲液(红色，货号：YT419)，在0.8%琼脂糖凝胶中电泳约30分钟后拍照。实际抽提效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，本图仅供参考。
本试剂盒使用便捷。本试剂盒采用磁珠纯化，整个抽提过程最快约需50分钟。一方面，本试剂盒优化了裂解液成分，仅10分钟就能完成裂解步骤；另一方面，优化了抽提体系，裂解完成后抽提的时间约为35分钟。相比于传统的离心柱式抽提法，本试剂盒的操作流程显著简化，缩短了抽提时间。和国外同类磁珠纯化产品相比，所需操作步骤和操作时间基本一致。
本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的磁珠纯化介质进行DNA分离纯化，无须使用酚、氯仿等有毒有害有机试剂。
本制品推荐使用抗凝血液作为样品。对于含无核红细胞的抗凝血液样品(如人全血、小鼠全血等)，建议用量为100～200μL；对于含有核红细胞的抗凝血液样品(如水产类、鸟类、禽类等)，建议用量为5～15μL。本试剂盒也适用于培养动物细胞的基因组DNA提取，建议细胞量为100～200万个。

组分	50T	200T
BalbMag磁珠	1mL	4mL
裂解液	10mL	40mL
洗涤液	30mL	120mL
洗脱液	5mL	20mL
蛋白酶K	1mL	4mL

保存：室温，有效期1年，其中蛋白酶K需置于-20℃。

自备器材

磁分离装置，异丙醇和无水乙醇。

注意事项

BalbMag磁珠长期不使用时，可以4℃保存，4℃可以保存更长时间。蛋白酶K室温(15～25℃)存放一周，活力无明显下降。
由于血液样品的种属、类别及抗凝剂的特殊性，基因组DNA的A260/A230比值可能会较低，但不影响后续PCR扩增、酶切、基因分型等应用。
磁珠在静置后会发生沉降，使用前一定要适当涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。
磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠聚集后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。
请使用推荐的样品量。如果样品量过大，可能造成磁珠聚集，会影响洗涤进而影响抽提获得的DNA纯度。发生磁珠聚集时，洗涤时需尽量分散磁珠，这样可有效改善抽提效果。如果发生磁珠聚集现象，建议在后续实验中适当减少样品用量。
本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。
本试剂盒需使用56℃水浴，请提前作好准备。50～56℃水浴均可以使用。
除特别说明外，本制品说明书中每次Vortex应控制在5～10秒左右。
如需制备不含RNA的高纯度总DNA，需自备DNase free的RNase A，推荐订购百奥莱博的RNase A (YT005/YT006)。
洗涤液中含有一定浓度的醇类，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

样品的准备。
取全血样品100μL，或有核红细胞抗凝血样品10μL，置于1.5mL离心管底部。
- 全血的用量一般为50～200μL，如果样品量发生变化，后续裂解液、乙醇等用量也要相应发生变化。
- 冷冻样品待完全解冻后再进行提取，但新鲜血液样品的得率和片段大小更佳。
加入100μL PBS (货号：YTB1103)，使血液总体积为200μL。
- 血液样本体积不足200μL时，用PBS补足至200μL即可。
清除RNA (可选做)。如果希望获得不含RNA的高纯度基因组DNA，加入4μL 100mg/mL DNase free的RNase A (货号：YT006)，Vortex混匀。室温(15～25℃)放置2分钟。
- 在不做清除RNA的操作步骤的情况下，会导致最后获得的总DNA含有小部分RNA。如果残余的少量RNA对后续实验没有干扰，可以不进行本步实验操作，直接进入步骤4。
加入20μL蛋白酶K，Vortex混匀。
加入200μL裂解液，Vortex混匀。65℃孵育10分钟，期间每2-3分钟Vortex 1次。
- 加入裂解液后必须立即Vortex混匀。不可把蛋白酶K直接和裂解液混合。
加入300μL异丙醇，Vortex混匀。
- 加入异丙醇后必须充分混匀，否则会严重影响抽提效果。加入异丙醇后可能会产生沉淀，属正常现象。
向步骤6中的混合物加入20μL BalbMag磁珠悬液(使用前务必混匀)，轻柔混匀后，室温放置10分钟，每3-5分钟Vortex 1次。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
- 磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。
加入600μL洗涤液，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。
加入600μL无水乙醇，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。重复本操作一次。
将离心管室温放置3～10分钟，或置于37℃鼓风烘箱3～5分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发即可。
加入50～100μL洗脱液，轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，60℃孵育10分钟，其间Vortex离心管1～2次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，置于-20℃保存。所得溶液即为纯化的总DNA。
- 如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20μL，但洗脱下来的DNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37℃预热片刻对得率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原磁珠再洗脱一次，可提高得率约10～30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15～40%的DNA。

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